加载中...
  • 首 页
  • 氘灯
  • 下载中心
  • 色谱问题
  • 您当前位置:北京色谱信息网 >> 色谱文章 >> 技术应用 >> 浏览文章
    糖类分析解决方案——Xbridge Amide色谱柱的使用与方法开发(waters)
    日期:2015-8-18 9:55:37 来源:北京色谱信息网   【字体:
    最最新糖类分析解决方案——Xbridge Amide色谱柱的使用与方法开发
     
    糖分析的背景信息简介
    *碳水化合物(糖)是自然界中丰度最高的一类有机化合物,他们在生理过程中有着非常重要的作用。多聚糖在我们的实际生活中无处不在,它可以被水分解成单糖,二糖,寡聚糖(3-10个单糖)和聚多糖(包含上千个单糖)等。
    *碳水化合物由C/H/O组成,简写成C(H2O)最简单的碳水化合物是单糖,单糖由许多羟基链和一个醛基或者酮基组成。游离的醛或者酮基能将铜离子还原成亚铜离子,因此这样的糖被称为还原糖。
    *当两个单糖被糖苷键连接便形成双糖。
    *果糖、葡糖糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖是最常见的食用糖。
    *通常来源于水果,蔬菜和蜂蜜。
    糖的立体异构体
    *单糖存在半缩醛货半缩醛的环状结构,在水溶液中开链和环状结构平衡存在
    *糖的差异如果仅仅是单个碳原子的立体化学,被称为“立体异构”它是很难通过色谱进行分离的。
    目前LC技术分析碳水化合物所面临的问题
    *通常使用氨基柱或多氨基柱
    *通常使用示差检测器-主要是由于碳水化合物的紫外吸收弱
    *通常遇到的问题(1,盐干扰2,端机异构体的变旋3,某些糖和色谱填料形成的SCHIFF 碱,4,高温条件下会造成还原型糖的损失5,色谱柱流失,不能兼容MS/ELSD检测器6,色谱柱寿命短,7,不能用于梯度方法)
    如图一做有不同氨基柱五种糖类分析的时候,当盐分的化合物对实验有很大的影响,打*的部分可以看到第一支色谱柱5号峰分析时基线会太高且有拖尾第二支色谱柱中使的1号峰前沿在第三支色谱柱对于1号峰影响尤为严重。
    如图二α 、β葡萄糖变旋异构时会出现2个峰值,同样是葡萄糖出出现分叉这样的话进行化合物分析定量会产生影响
    BEH Amide系列色谱柱
    色谱柱 配基类型 粒径 配基密度 碳含量 封尾类型 建议PH
    BEH Amide 三键键合酰胺 1.7,3.5um 7.5umol/m2 12% None 2-11
     
    1, 如图三用BEH Amide做分析的时,这些盐份不会影响到糖的分离,我们把盐的浓度从5mol调到10mol甚至40mol时都不会对分离产生影响。
     
    2,氨基键合的色谱柱会形成schiff碱,而BEH Amide键合的是酰胺基不会形成schiff碱。
     
    3,如图四第一支是采用通常的方式,在75%的乙腈条件下去分离端基异构或者变旋异构的化合物的时候,会有峰值出来,在第二支加入0.2%TEA的时候可以看到分叉的峰渐渐合并起来在第三支将同时柱温调到90℃ 4号麦芽糖和5号乳糖都会迅速稳定下来的变旋异构会形成一个峰
     
    4,如图五绿色是常规氨基柱,蓝色为BEH Amide红色为聚胺基polyamine加入了0.1% TEA 对于酰胺基柱的柱流失是非常小的,可以让我们更好的对检测器的选择。
     
    5,如图六在碱性条件下高温的时候,流动相是丙酮,在不同的样品基质当中,对保留和RSD都会有很高的结果。
    6,对目标化合物有个很好的设定时 对各批次间做分析时会出现良好的
     
    BEH Amide固定相优势
    *化学稳定性-传统氨基柱流失严重,稳定性低
    *Schiff碱或烯胺的形成令待检测物浓度减低-氨基柱或聚氨基柱会形成schiff碱或烯胺
    *选择性-与BEH HILIC及硅胶HILIC比,具有不同的选择性
    *保留能力-与BEH HILIC比提高了保留能力
    *应用案例:牛奶,水果,面包,酒,薯片,动物饲料,药用辅料如止咳糖浆等
    样品制备
    常用BEH Amide系列常用规格和价格(其他规格,具体折扣和货期请咨询客服人员)
    色谱柱 长度 内径 膜度 部件号 市场价格
    BEH Amide
    50mm 2.1mm 1.7um 186004800 8601.84元
    150mm 2.1mm 1.7um 186004802 9486.36元
    100mm 3mm 1.7um 186004805 8936.46元
     
    (北京色谱信息网有该系列 BEH Amide色谱柱的所有规格,具体折扣和货期请联系在线客服人员或者致电18612174297 吴春兰 谢谢您的支持!)
     
    如何开发适合实验室的糖类分析的开发?
    样品的制备
    *非常简单的制备
    *液体样本(酒类的葡萄酒,烈酒的白酒等)
    -稀释:50:50ACH/H2O –-过滤,使用0.45um&0.22um PVDF(适合有机相和水相)滤膜(如果需要)
    *提取固态样本-称取样品到(-3g)到50ml离心管
    —加入25ml, 50:50ACH/H2O并混匀(均质)---离心,3200rpm,30分钟----收集上清液,过0.45um&0.22umPVDF滤膜
    *根据样品及检测器的需要进行稀释
    *对于基质非常复杂或者待分析物浓度很低的样品,需要使用如SPE等富集策略进行处理
    *建议使用VanGuard保护柱以延长色谱柱寿命
    *当分析还原糖(如果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖、乳糖、甘油醛等)请按照以下建议操作,否则会产生分叉峰
     
    -使用较低流速(2.1-50mm的色谱柱使用0.10-0.13ml/min流速)-对于较长柱子如2.1-100mm,可以使用较高的流速如0.3ml/min—在流动相A和B中分别加入三乙胺或氯水----复杂样品建议使用梯度条件-----如流动相使用丙酮,请不要使用丙
    酮溶解样品或者使用丙酮作为洗针液(通用的进样溶液是75/25乙腈/甲醇,使用此条件可以获得较好的样品溶解度和色谱峰形,当待分析的糖在有机溶剂中溶解度比较差时,使用较高的水相溶液可以接受的,通常50/50的乙腈/水可以提供较好的结果)-------洗针条件可按如下设置:强洗20/80乙腈/水800ul弱洗:75/25乙腈/水500ul
    *对于用UPLC/ELSD分析单糖和二糖,典型的等度条件如下
    (1,含0.2%三乙胺的75%乙腈/水做流动相;35℃流速;0.13ml/min 2.1-50mm BEH Amide 色谱柱2,含0.05%三乙胺的77%乙腈/水做流动相;85℃流速;0.15ml/min 2.1-50mm BEH Amide 色谱柱3,含0.2%三乙胺的75%乙腈/水做流动相;35℃流速;0.2ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱)
    *对于用UPLC/ELSD分析复杂单糖和二糖,典型的等度条件如下
    (含0.1%氨水的75%乙腈/水做流溶剂;35℃流速;0.13ml/min 2.1-50mm BEH Amide 色谱柱)
    *对于用UPLC/ELSD分析复杂多糖混合物,典型的梯度条件如下
    (分别在流动相A和B中加入三乙胺:1,10分钟内乙腈比例由80%变化为50%:流动相中含0.2%三乙胺;35℃流速;0.13ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱或者使用同样的梯度表0.13ml/min 2.1-150mm BEH Amide 色谱柱。2,10分钟内乙腈比例由80%变化为50%:流动相中含0.05%三乙胺;85℃流速;0.15ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱)
    *对于用UPLC/MS分析复杂多糖混合物,典型的梯度条件如下
    (分别在流动相A和B中加入氨水: 10分钟内乙腈比例由75%变化为45%:流动相中含0.1%氨水;35℃流速;0.2ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱)
     
     
    新糖类分析解决方案——Xbridge Amide色谱柱的使用与方法开发
     
    糖分析的背景信息简介
    *碳水化合物(糖)是自然界中丰度最高的一类有机化合物,他们在生理过程中有着非常重要的作用。多聚糖在我们的实际生活中无处不在,它可以被水分解成单糖,二糖,寡聚糖(3-10个单糖)和聚多糖(包含上千个单糖)等。
    *碳水化合物由C/H/O组成,简写成C(H2O)最简单的碳水化合物是单糖,单糖由许多羟基链和一个醛基或者酮基组成。游离的醛或者酮基能将铜离子还原成亚铜离子,因此这样的糖被称为还原糖。
    *当两个单糖被糖苷键连接便形成双糖。
    *果糖、葡糖糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖是最常见的食用糖。
    *通常来源于水果,蔬菜和蜂蜜。
    糖的立体异构体
    *单糖存在半缩醛货半缩醛的环状结构,在水溶液中开链和环状结构平衡存在
    *糖的差异如果仅仅是单个碳原子的立体化学,被称为“立体异构”它是很难通过色谱进行分离的。
    目前LC技术分析碳水化合物所面临的问题
    *通常使用氨基柱或多氨基柱
    *通常使用示差检测器-主要是由于碳水化合物的紫外吸收弱
    *通常遇到的问题(1,盐干扰2,端机异构体的变旋3,某些糖和色谱填料形成的SCHIFF 碱,4,高温条件下会造成还原型糖的损失5,色谱柱流失,不能兼容MS/ELSD检测器6,色谱柱寿命短,7,不能用于梯度方法)
    如图一做有不同氨基柱五种糖类分析的时候,当盐分的化合物对实验有很大的影响,打*的部分可以看到第一支色谱柱5号峰分析时基线会太高且有拖尾第二支色谱柱中使的1号峰前沿在第三支色谱柱对于1号峰影响尤为严重。
    如图二α 、β葡萄糖变旋异构时会出现2个峰值,同样是葡萄糖出出现分叉这样的话进行化合物分析定量会产生影响
    BEH Amide系列色谱柱
    色谱柱 配基类型 粒径 配基密度 碳含量 封尾类型 建议PH
    BEH Amide 三键键合酰胺 1.7,3.5um 7.5umol/m2 12% None 2-11
     
    1, 如图三用BEH Amide做分析的时,这些盐份不会影响到糖的分离,我们把盐的浓度从5mol调到10mol甚至40mol时都不会对分离产生影响。
     
    2,氨基键合的色谱柱会形成schiff碱,而BEH Amide键合的是酰胺基不会形成schiff碱。
     
    3,如图四第一支是采用通常的方式,在75%的乙腈条件下去分离端基异构或者变旋异构的化合物的时候,会有峰值出来,在第二支加入0.2%TEA的时候可以看到分叉的峰渐渐合并起来在第三支将同时柱温调到90℃ 4号麦芽糖和5号乳糖都会迅速稳定下来的变旋异构会形成一个峰
     
    4,如图五绿色是常规氨基柱,蓝色为BEH Amide红色为聚胺基polyamine加入了0.1% TEA 对于酰胺基柱的柱流失是非常小的,可以让我们更好的对检测器的选择。
     
    5,如图六在碱性条件下高温的时候,流动相是丙酮,在不同的样品基质当中,对保留和RSD都会有很高的结果。
    6,对目标化合物有个很好的设定时 对各批次间做分析时会出现良好的
    BEH Amide固定相优势
    *化学稳定性-传统氨基柱流失严重,稳定性低
    *Schiff碱或烯胺的形成令待检测物浓度减低-氨基柱或聚氨基柱会形成schiff碱或烯胺
    *选择性-与BEH HILIC及硅胶HILIC比,具有不同的选择性
    *保留能力-与BEH HILIC比提高了保留能力
    *应用案例:牛奶,水果,面包,酒,薯片,动物饲料,药用辅料如止咳糖浆等
    样品制备
    常用BEH Amide系列常用规格和价格(其他规格,具体折扣和货期请咨询客服人员)
    色谱柱 长度 内径 膜度 部件号 市场价格
    BEH Amide 50mm 2.1mm 1.7um 186004800 8601.84元
    150mm 2.1mm 1.7um 186004802 9486.36元
    100mm 3mm 1.7um 186004805 8936.46元
    如何开发适合实验室的糖类分析的开发?
    样品的制备
    *非常简单的制备
    *液体样本(酒类的葡萄酒,烈酒的白酒等)
    -稀释:50:50ACH/H2O –-过滤,使用0.45um&0.22um PVDF(适合有机相和水相)滤膜(如果需要)
    *提取固态样本-称取样品到(-3g)到50ml离心管
    —加入25ml, 50:50ACH/H2O并混匀(均质)---离心,3200rpm,30分钟----收集上清液,过0.45um&0.22umPVDF滤膜
    *根据样品及检测器的需要进行稀释
    *对于基质非常复杂或者待分析物浓度很低的样品,需要使用如SPE等富集策略进行处理
    *建议使用VanGuard保护柱以延长色谱柱寿命
    *当分析还原糖(如果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖、乳糖、甘油醛等)请按照以下建议操作,否则会产生分叉峰
    -使用较低流速(2.1-50mm的色谱柱使用0.10-0.13ml/min流速)-对于较长柱子如2.1-100mm,可以使用较高的流速如0.3ml/min—在流动相A和B中分别加入三乙胺或氯水----复杂样品建议使用梯度条件-----如流动相使用丙酮,请不要使用丙酮溶解样品或者使用丙酮作为洗针液(通用的进样溶液是75/25乙腈/甲醇,使用此条件可以获得较好的样品溶解度和色谱峰形,当待分析的糖在有机溶剂中溶解度比较差时,使用较高的水相溶液可以接受的,通常50/50的乙腈/水可以提供较好的结果)-------洗针条件可按如下设置:强洗20/80乙腈/水800ul弱洗:75/25乙腈/水500ul
    *对于用UPLC/ELSD分析单糖和二糖,典型的等度条件如下
    (1,含0.2%三乙胺的75%乙腈/水做流动相;35℃流速;0.13ml/min 2.1-50mm BEH Amide 色谱柱2,含0.05%三乙胺的77%乙腈/水做流动相;85℃流速;0.15ml/min 2.1-50mm BEH Amide 色谱柱3,含0.2%三乙胺的75%乙腈/水做流动相;35℃流速;0.2ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱)
    *对于用UPLC/ELSD分析复杂单糖和二糖,典型的等度条件如下
    (含0.1%氨水的75%乙腈/水做流溶剂;35℃流速;0.13ml/min 2.1-50mm BEH Amide 色谱柱)
    *对于用UPLC/ELSD分析复杂多糖混合物,典型的梯度条件如下
    (分别在流动相A和B中加入三乙胺:1,10分钟内乙腈比例由80%变化为50%:流动相中含0.2%三乙胺;35℃流速;0.13ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱或者使用同样的梯度表0.13ml/min 2.1-150mm BEH Amide 色谱柱。2,10分钟内乙腈比例由80%变化为50%:流动相中含0.05%三乙胺;85℃流速;0.15ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱)
    *对于用UPLC/MS分析复杂多糖混合物,典型的梯度条件如下
    (分别在流动相A和B中加入氨水: 10分钟内乙腈比例由75%变化为45%:流动相中含0.1%氨水;35℃流速;0.2ml/min 2.1-100mm BEH Amide 色谱柱)
    0% (0)
    0% (10)
    北京色谱信息网
    • 中国食品药品检定研究院
    • 安捷伦科技(中国)有限公司
    • 沃特世科技(上海)有限公司
    • 岛津技迩(上海)商贸有限公司
    • 德国Dr.Ehrenstorfer
    • 赛默飞世尔科技(原热电公司)
    • 德国默克公司
    • 美国赛分科技有限公司
    新手上路
    会员中心
    配送/支付方式
    服务保证
    北京色谱信息网

    Copyright© 2013 北京色谱信息网(www.cmtap.com) All Rights Reserved.
    咨询电话:010-53515223 ,地址:北京市海淀区上地十街一号院
    咨询QQ:361046187 QQ:742637953 邮箱:cmtapa@yeah.net 京公网安备:11010802014908
    京ICP备13014499号-1 (技术支持:北京百欧博伟生物技术有限公司)

    客服
    live chat
    在线营销
    live chat