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    液相色谱柱的使用与维护
    日期:2016-1-14 16:24:04 来源:北京色谱信息网   【字体:

    液相色谱柱的使用与维护

    3-1反相柱

    反相柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。因此,在第一次使用时,请确保您所使用的流动相和甲醇(或乙腈)/水互溶。由于色谱柱在运输过程中可能会变干,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱。首先应用较低流速冲洗,待色谱柱完全侵湿后,在将流速缓慢提高。

    如果要使用与水不互溶的有机溶剂作为流动相,首先要用于水互溶的有机溶剂过滤,例如:水—甲醇—异丙醇二氯甲烷。

    如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意含水量很高(约95%)的流动相过滤,样品分析完后,冲洗柱子亦然 。传统的方法使用纯水冲洗,但对于非极性柱,如c8C18,由于纯水不能侵润形成水膜,出现样品不保留而分不开,重现性差,所以对于一般的C18C8,有机溶剂的含量不能低于5%

    3-2正相柱

    硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试厚后是保存在正庚烷中的。第一次使用时类似于反相柱,流动相柱要与正庚烷互溶。同样,要使用与庚烷不互溶的溶剂,也有先进行过滤。

    3-3平行色谱柱。

    用流动相平行色谱柱,需将流速缓慢的提高,直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间平衡)。

    建议用来冲洗的溶剂体积:

     

    色谱柱规格  柱体积 溶剂体积

    150MM*4.6MM  2.5MI  50MI

    250MM*4.6MM  50MI  100MI

    250MM*10 MM  20MI  400MI

    如果色谱柱在使用一段时间后出现株效下降的情况,去参考下面的方法进行色谱柱的再生。

    a) 反相柱的再生:依次采用20——30倍色谱柱体积的甲醇:水=10:90V/V,乙腈,异丙醇作为流动相冲洗色谱柱,完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。

    b) 正相柱的再生:依次以20——30倍色谱柱的体积的正己烷,二氯甲烷、异丙醇、甲醇作为流动相冲洗色谱柱,然后在以相反的顺序冲洗色谱柱。要怎样上诉溶剂必须严格脱水。

     

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